肺炎链球菌蛋白PotD的表达纯化及免疫活性分析

作者：闵迅; 黄健; 黄美容; 钟文; 董杰; 陈特; 张雪梅

来源：第三军医大学学报, 2014, 36(16): 1660-1663.

DOI：10.16016/j.1000-5404.2014.16.006

• 肺炎链球菌
• 谷氨酰胺tRNA合成酶
• 保守性
• 抗原性

目的研究PotD蛋白免疫保护活性,探讨其作为疫苗候选蛋白的可能性。方法构建、表达、纯化PotD蛋白,通过免疫BALB/c小鼠以制备多克隆抗体,评估其免疫原性,并进一步分析其对儿童的免疫保护效应;采用PCR技术扩增8株不同血清型S.pn中PotD基因后进行测序鉴定分析基因序列的保守性;再通过western blot技术分析8株菌中PotD蛋白的表达水平,以评估PotD蛋白保守性;采用粘附抑制实验分析PotD蛋白的免疫保护活性。结果成功获得纯度大于95%的PotD目的蛋白,将其免疫小鼠后获得高效价抗体;在10岁以下儿童S.pn感染者及健康带菌者血清中均有抗PotD存在;对8株不同血清型S.pn PotD基因进行PCR扩增和测序发现8株细菌中该基因具有高度保守性;Western blot技术分析证实,8株不同血清型S.pn均表达该蛋白;粘附抑制实验证实,重组PotD蛋白及其抗体均能够显著抑制S.pn对A549细胞的粘附作用。结论 PotD蛋白制备方便,在我国流行S.pn血清型中有良好的保守性和免疫原性,能够显著抑制S.pn对宿主细胞的粘附,可能成为良好的蛋白疫苗靶点。

• 单位
  重庆医科大学; 遵义医学院附属医院