腺病毒载体介导PDX-1在骨髓间充质干细胞中的表达

作者：李艳华; 张锐; 王韫芳; 赵连旭; 陈琳; 岳文; 裴雪涛

来源：生物化学与生物物理进展, 2004, (06): 538-542.

• PDX-1
• 腺病毒载体
• 间充质干细胞

为研究PDX 1基因在骨髓间充质干细胞中的表达情况及生物学功能的发挥 ,构建了含PDX 1基因的重组腺病毒载体 .酶切PDX 1基因并连入穿梭质粒 pAdTrack CMV .用电穿孔法使穿梭质粒pAdTrack CMV PDX 1与病毒骨架质粒 pAdEasy 1在大肠杆菌BJ5 183中同源重组 .利用脂质体介导重组腺病毒载体转染 2 93细胞 ,包装出完整的腺病毒 .分离、培养、扩增骨髓间充质干细胞 .用重组腺病毒感染间充质干细胞 .用荧光显微镜、RT PCR、免疫荧光染色等方法检测PDX 1、胰岛素基因及蛋白质的表达 ,用放射免疫分析法检测转基因细胞分泌胰岛素情况 .结果表明 :通过测序、PCR、酶切等鉴定PDX 1基因已正确插入穿梭质粒中 ,并与病毒骨架质粒重组 .重组腺病毒滴度为 6 3× 10 7PFU/ml.通过荧光显微镜观察证实重组腺病毒可高效感染骨髓间充质干细胞 ,经RT PCR、免疫荧光染色证实转染 pAd PDX 1后培养 7天的细胞中有PDX 1及胰岛素基因的表达 .这些转基因的细胞向胞外分泌的胰岛素量为 (15 2 1± 3 5 0 )mIU/L .

• 单位
  军事医学科学院