重组cTnI-cTnC复合抗原的制备及其性能验证

作者：武强^*; 史定刚; 丁建静

来源：中国生物制品学杂志, 2020, 33(05): 530-534.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003054

• 心肌肌钙蛋白I
• 心肌肌钙蛋白C
• 大肠埃希菌
• 复合抗原
• 抗原反应性
• 储存稳定性

目的采用E. coli表达系统分别表达心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)和cTnC,制备cTnI-cTnC二元复合蛋白,并验证其抗原性能。方法将合成的cTnI和cTnC基因片段分别插入pET-22b和pET-28a原核表达载体,构建重组表达质粒,并分别转化E. coli BL21(DE3),IPTG诱导表达。将表达的cTnI和cTnC蛋白经Ni2+螯合亲和层析和离子交换层析两步纯化后,在Ca2+存在的条件下按摩尔比1︰1混合,制备cTnI-cTnC二元复合蛋白。采用双抗夹心ELISA法检测复合蛋白的抗原反应性;将cTnI单体和cTnI-cTnC复合蛋白稀释后,均分别于4和37℃条件下放置14 d,检测cTnI抗原放置前后的浓度变化,验证其储存稳定性。结果纯化的cTnI和cTnC重组蛋白的SDSPAGE纯度均达90%以上。与对照抗原(8IC63二元复合抗原)比较,cTnI-cTnC复合蛋白与抗体反应信号较强,且能够同时被cTnI和cTnC抗体识别;经37℃热加速试验后,cTnI单体蛋白浓度降低约80%,而cTnI-cTnC复合蛋白的浓度变化幅度在±15%间。结论制备的cTnI-cTnC二元复合蛋白具有良好的抗原反应性和储存稳定性,为下一步制备反应性良好和储存稳定的cTnI检测质控校准品提供了可靠的原料。

• 单位
  美康生物科技股份有限公司