Pichia酵母表达重组人可溶性TRAIL的纯化与生物活性

作者：李茹冰; 傅泳航; 李继东; 佟明华; 杨联萍; 孔祥平

来源：中国生物制品学杂志, 2006, (03): 309-312.

DOI：10.13200/j.cjb.2006.03.98.lirb.031

• 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体
• Pichia酵母
• 生物活性 TNF-related apoptosis inducing ligand(TRAIL)
• Pichia pastoris
• Bioactivity

目的分离纯化Pichia酵母表达的重组人可溶性TRAIL,并检测其生物活性。方法以Pichia酵母分泌型表达TRAIL,采用硫酸铵沉淀和柱层析纯化可溶性TRAIL蛋白。以SDSPAGE、ESIMS和Westernblot法鉴定其纯度及特异性。以细胞透射电镜、DNALadder和MTT法检测其诱导肿瘤细胞凋亡活性。结果目的蛋白以可溶形式存在,蛋白相对分子质量22000,纯化后纯度95%。Westernblot证实为TRAIL蛋白。电镜、DNALadder和MTT均证实其具有诱导肿瘤细胞凋亡活性。结论Pichia酵母表达rhsTRAIL可用柱层析法纯化,并具有诱导肿瘤细胞凋亡的生物活性。

• 单位
  中国人民解放军第四五八医院