本发明属于生物医药和荧光检测技术领域,具体涉及一种HDAC、CTSL响应的诊疗一体化材料及其制备方法与应用。该材料内含有抗肿瘤药物Cy-NH-2,且具有大量HDAC、CTSL特异性响应的键,在高表达HDAC、CTSL的肿瘤细胞内产生酶响应而断裂,从而将抗肿瘤药物Cy-NH-2快速释放于肿瘤细胞内,具有靶向给药的优势;此外,Cy-NH-2还具有在特定波长激发下能够对肿瘤细胞进行成像,具有巨大的临床应用潜能。