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摘要
目的研究嗜酸性粒细胞(eosinophil, EO)参与新生儿坏死性小肠结肠炎(neonatal necrotizing enterocolitis, NEC)的发生及作用机制。方法①收集2017年至2021年在南京医科大学附属儿童医院收治的96例NEC患儿和140例同期诊断的非肠道炎症性疾病新生儿的临床资料。将96例NEC作为患儿NEC组, 男58例, 女38例;早产儿34例, 足月儿62例;出生体重为(2.85±0.75 )g;入院日龄为(11.87±9.96) d; EO绝对值为(0.27±0.23)×109/L。将余140例作为患儿对照组, 男93例, 女47例;早产儿16例, 足月儿124例;出生体重为(3.28±0.52) g;入院日龄为(20.57±16.32) d;EO绝对值为(0.19±0.15)×109/L。患儿NEC组根据Bell分期分为Bell Ⅲ期组17例及Bell Ⅱ期组79例。从Bell Ⅲ期行手术治疗患儿术中切取NEC炎症损伤的肠壁全层作为患儿实验组, 其附近损伤较轻的肠壁切缘全层作为患儿自身对照组。比较Ⅲ期组和Ⅱ期组患儿确诊后24 h内第一次血常规检查所得EO绝对值, 对可能参与NEC发生的影响因素进行Logistic回归分析。通过受试者操作特征(receiver operator char-acteristic, ROC)曲线评价EO绝对值对NEC病情评估的作用。②动物造模选用7日龄C57BL/6J小鼠共75只, 通过高渗配方奶灌胃+缺氧的方法构建NEC小鼠模型, 分为小鼠对照组(15只)和小鼠NEC组(60只)。接着分别通过腹腔注射DMSO、DMOG和SB297006处理NEC组小鼠(共45只), 分为DMSO组、DMOG组和SB297006组(各15只)。③检测患儿实验组和小鼠NEC组肠组织的缺氧诱导因子1A (hypoxia-inducible factor 1α, HIF1A)、嗜酸性粒细胞趋化因子(C-C motif chemokine ligand 11, CCL11)和嗜酸性粒细胞过氧化物酶(eosinophil peroxidase, EPX)的表达。腹腔注射DMOG、SB297006处理小鼠NEC组, 检测肠道屏障完整性、肠组织炎症程度及Epx、Hif1α、Ccl11的表达水平。结果①在外周血EO绝对值与NEC的相关性方面, 患儿NEC组与患儿对照组相比, 外周血EO绝对值较高, 为(0.27± 0.23)×109/L比(0.19±0.15)×109/L, 差异具有统计学意义(P=0.004)。Ⅱ期组患儿EO绝对值高于Ⅲ期组, 为(0.30±0.22)×109/L比(0.13±0.22)×109/L, 差异具有统计学意义(P<0.006)。Logistic回归分析显示出生体重(OR=0.44, 95%CI:0.24～0.82)、EO绝对值(OR=9.72, 95%CI: 2.08～45.36), 是参与NEC发生的主要影响因素。EO绝对值预测NEC病情严重程度的曲线下面积为0.818, 其敏感度和特异度分别为88.24%和72.15%。②在HIF1A通过调节CCL11参与NEC的发生方面, 相较于患儿自身对照组, 在患儿实验组肠组织中HIF1A、CCL11的表达增高, 患儿实验组和患儿自身对照组HIF1A mRNA的表达水平为0.2 961±0.1 489比0.1 001±0.0 770, HIF1A蛋白表达水平为0.7 507±0.2 276比0.0 537±0.0 210, CCL11 mRNA的表达水平为0.0 512±0.0 590比0.0 099±0.0 091 , CCL11蛋白表达水平为0.7 352±0.1 987比0.1 589±0.0 802。③NEC模型小鼠肠道绒毛短且细胞排列紊乱, 绒毛核心分离, 肠道黏蛋白减少, 小鼠NEC组肠组织中肠屏障相关蛋白Cldn1的相对荧光强度降低, 炎症因子Tlr4的相对荧光强度增高。Cldn1在DMOG组表达升高, SB297006组表达下降;Tlr4在DMOG组表达下降, SB297006组表达升高。在DMOG组与DMSO组相比, 小鼠肠组织中Hif1α和Ccl11的表达水平升高, Hif1α蛋白表达水平为1.0 310±0.3 428比0.5 854±0.1 084, Ccl11 mRNA的表达水平为0.0 331± 0.0 373比0.0 028±0.0 025, Ccl11蛋白表达水平为0.8 196±0.2 145比0.3 543±0.2 638。结论 EO可能受到HIF1A调控后参与NEC的发生, 具有用来评估NEC病情严重程度的潜在作用。
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