摘要
【目的】东方蜜蜂微孢子虫Nosema ceranae侵染蜜蜂导致微孢子虫病,但侵染机制未明。本研究拟在前期工作基础上,验证nce-miR-15325的相对表达量及序列信息,并进一步检测nce-miR-15325及其靶基因在东方蜜蜂微孢子虫侵染意大利蜜蜂Apismelliferaligustica工蜂过程的相对表达量,为进一步探究nce-miR-15325调控侵染的功能和机制提供依据。【方法】利用Stem-loopRT-PCR和Sanger测序对nce-miR-15325进行相对表达量及序列信息验证。利用相关生物信息学软件对nce-miR-15325的靶基因进行信息预测及分析。通过RT-qPCR检测nce-miR-15325及其靶基因的相对表达量。【结果】鉴定到在东方蜜蜂微孢子虫孢子中nce-miR-15325真实存在并表达。预测到nce-miR-15325的11个靶基因,其中分别有3、4、7和4个靶基因可注释到KEGG、GO、Nr和Swissprot数据库。与接种后1 d相比,nce-miR-15325在2 dpi(day post inoculation, dpi)的表达量变化不显著,而在4、6和8 dpi时,相对表达量均显著下调(P<0.05),总体表达趋势呈下调。相较于1 dpi,靶基因NCSS在2、4、6和8 dpi的表达量均显著下调(P<0.05);类似的,靶基因DTⅢ在2、4、6和8dpi的表达量均显著下调(P<0.05),总体上表现出下降的表达趋势。【结论】证实了东方蜜蜂微孢子虫孢子中nce-miR-15325存在和表达的真实性,明确了在东方蜜蜂微孢子虫侵染过程的nce-miR-15325及其靶基因的动态表达模式,揭示nce-miR-15325通过正调控NCSS和DTⅢ表达潜在调节侵染过程。
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