ATF4通过调节Parkin减轻棕榈酸诱导的肾小球足细胞凋亡

作者：徐凌珂; 吴玥; 刘婷; 万姜敏; 杜晓刚^*

来源：重庆医科大学学报, 2020, 45(05): 566-574.

DOI：10.13406/j.cnki.cyxb.002239

• 棕榈酸
• 肾小球足细胞
• 内质网应激
• ATF4
• Parkin
• 凋亡

目的:探讨转录激活因子4(activating transcription factor-4,ATF4)调节Parkin在棕榈酸(palmitic acid,PA)诱导的肾小球足细胞凋亡中的作用。方法:SD大鼠20只随机分2组:普通饮食组(n=10)及高脂饮食组(n=10)喂养12周后,采集血清检测甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇酯(total cholesterol,TC);Tunel染色检测肾组织细胞凋亡情况;免疫组化、Western blot检测肾组织Cleaved-caspase3和ATF4、Parkin蛋白的表达。在体外实验中,采用PA刺激足细胞,或用质粒转染过表达Parkin或用腺病毒敲低ATF4表达,Western blot检测足细胞凋亡相关蛋白Cleaved-caspase3表达水平,流式细胞术检测足细胞的凋亡率。结果:高脂饮食组大鼠TG和TC的表达水平(2.700±0.565、2.620±0.565)分别与普通饮食组(0.780±0.165、1.540±0.377)相比明显增加(t=-7.987,P=0.000;t=-3.895,P=0.003)。肾组织凋亡相关蛋白Cleaved-caspase3、Parkin蛋白和ATF4蛋白表达水平,高脂饮食组(2.257±0.326、1.587±0.162、1.851±0.347)较普通饮食组(1.000±0.190、1.000±0.323、1.000±0.186)明显增加(P=0.000,P=0.003,P=0.000)。采用不同浓度PA刺激发现,足细胞ATF4、Parkin及Cleaved-caspase3的表达量150μmol/L PA组(1.689±0.235、1.529±0.057、1.773±0.186)、300μmol/L PA组(1.702±0.228、2.047±0.086、2.282±0.155)较对照组(1.000±0.030、1.000±0.066、1.000±0.039)明显增加(P=0.002,P=0.002;P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000)。采用Parkin过表达质粒转染足细胞后,与对照组(1.000±0.253)相比,Parkin过表达组的Parkin表达(105.242±24.108)明显升高(P=0.000)。进一步予以PA刺激,PA+Parkin过表达组足细胞[1.943±0.200,(9.590±0.418)%]较PA+空载质粒组[3.398±0.164,(15.140±1.227)%]其Cleaved-caspase3明显减少(P=0.000),细胞凋亡率明显降低(P=0.000)。进行腺病毒转染敲低ATF4后,与对照组(1.000±0.112、1.000±0.104、1.000±0.279)相比,shATF4 3组ATF4蛋白表达(0.175±0.064)、Parkin蛋白表达(0.518±0.130)明显减少(P=0.000,P=0.004),Cleavedcaspase3表达(2.305±0.150)明显增加(P=0.000)。细胞凋亡率shATF4组[(14.230±0.278)%]较对照组[(7.020±0.773)%]明显增加(P=0.000)。PA刺激已敲低ATF的足细胞,Cleaved-caspase3及细胞凋亡率相比PA+shRNA组[1.926±0.215,(20.943±4.194)%],PA+shATF4组[2.483±0.114,(46.643±10.675)%]明显增加(P=0.007,P=0.018)。结论:ATF4可以调节Parkin来减轻棕榈酸诱导的肾小球足细胞凋亡。

• 单位
  重庆医科大学附属第一医院