病毒性心肌炎患者血浆外泌体生物标志物蛋白质组学筛选

作者：赵宗磊; 杜松; 沈淑馨; 罗萍; 丁守坤; 王光公; 王丽霞^*

来源：中华医学杂志, 2019, 99(05): 343-348.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0376-2491.2019.05.005

• 病毒性心肌炎
• 血浆
• 外泌体
• 生物学标记
• 蛋白质组学

目的分析健康对照组(Control组)与病毒性心肌炎组(VMC组)血浆外泌体中的差异蛋白质组, 筛选可能与VMC早期诊断密切相关的蛋白标志物。方法分别收集河南省人民医院(2016年1月至2017年12月)Control组健康人及VMC组患者血浆标本各50份, 按照随机数字表法选取Control组(n=5)与VMC组(n=5)空腹血浆标本各1 ml, 分别利用超速离心法提取血浆外泌体后, 采用差异凝胶双向电泳(DIGE)技术进行蛋白质分离, 经差异分析软件处理后, 采集VMC组和Control组之间差异>2倍的蛋白质点, 通过应用基质辅助激光解吸电离-飞行时间/飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)对差异蛋白点进行鉴定。各组随机采取40份血浆外泌体标本, 采用VMC特异性差异蛋白进行酶联免疫吸附实验(ELISA)验证。结果 VMC组与Control组血浆外泌体蛋白组相比较, 共筛选出10个差异蛋白点, 包括8个上调蛋白点, 2个下调蛋白点。经质谱鉴定后, 表达上调的蛋白包括角蛋白2(KRT2)、角蛋白5(KRT5)、角蛋白9(KRT9)、角蛋白77(KRT77)、角蛋白78(KRT78)、锌-α2糖蛋白(AZGP1)、触珠蛋白(HP)和视黄醇结合蛋白4(RBP4);表达下调的蛋白是CD5抗原样蛋白(CD5L)和补体C1q亚基B(C1QB)。选取RBP4进行ELISA验证, 结果表明, 与Control组[(64.5±2.6)μg/L]相比较, VMC组[(148.7±3.9)μg/L]血浆外泌体中RBP4特异性表达上调(P<0.05), 与DIGE结果一致。结论成功筛选到10个VMC相关差异蛋白质, RBP4有可能成为VMC早期筛查及诊断的特异性生物标志物。

• 单位
  河南省人民医院