羊口疮病毒B2L、F1L截短融合基因的构建及生物信息学分析

作者：付强; 梁倩; 鲜思美^*; 包涛涛; 杨倩; 顾庆林; 郑维豪; 杜鹏; 青成欣

来源：黑龙江畜牧兽医, 2022, (21): 86-140.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2022.01.0190

• 羊口疮病毒
• B2L
• F1L
• SOE-PCR
• 生物信息学分析

为了构建羊口疮病毒(Orf virus, OrfV)B2L-F1L截短融合基因，并对该基因序列进行生物信息学分析，试验采用DNAStar生物信息学软件分别对B2L、F1L基因序列进行分析，截取B2L、F1L基因序列的主要抗原区域，分别设计引物，利用重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术对截取的B2L、F1L基因主要抗原区域进行融合，并与pMD-18T载体连接，构建重组质粒pMD18-T-B2L-F1L,经PCR鉴定、双酶切和测序验证正确后，应用生物信息学在线软件对B2L-F1L截短基因编码的蛋白质进行信号肽、跨膜结构、亲疏水性、柔韧性、抗原指数、抗原决定簇、糖基化结合位点、磷酸化结合位点、二级结构和三级结构进行预测。结果表明：构建的B2L-F1L截短融合基因大小约为1 080 bp,与预期目的片段大小相符；该蛋白有信号肽、无跨膜结构域，亲水性、抗原指数及柔韧性较好，有17个抗原决定簇，2个糖基化结合位点和28个磷酸化结合位点，二级结构中以α-螺旋和无规则卷曲占比较大。说明试验成功构建出羊口疮病毒B2L-F1L截短融合基因。

• 单位
  贵州大学; 动物科学学院