流行性乙型脑炎病毒SA14-14-2株囊膜蛋白的原核表达及其兔抗血清的制备

作者：徐飞; 冯继伟; 李鹏; 孟玉娇; 陈玉明; 王龙康; 王寅彪^*

来源：新乡医学院学报, 2022, 39(02): 101-105.

• 流行性乙型脑炎病毒
• 囊膜蛋白
• 原核表达
• 兔抗血清

目的 表达流行性乙型脑炎病毒(EEBV)的囊膜蛋白(E蛋白),制备该蛋白特异性兔抗血清，为建立诊断EEBV感染的检测方法奠定基础。方法 将pET32a-E质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)细胞，以终浓度为0.5 mmol·L-1的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷于37℃下诱导蛋白表达8 h,在8 mol·L-1尿素变性条件下，采用镍离子金属螯合亲和层析法对重组E蛋白进行纯化。透析复性后，以E蛋白为免疫原免疫新西兰兔制备兔抗血清，采用Western blot、酶联免疫吸附试验和免疫荧光分析法检测免疫血清中EEBV特异性抗体。结果 成功表达了重组E蛋白，经纯化、复性后可从1 L培养物中获得23.8 mg具有生物活性的E蛋白，该蛋白能与抗EEBV单抗发生特异反应。免疫制备的兔抗血清能与E蛋白发生特异反应，抗体效价高达1×51 200;兔抗血清能与EEBV感染的细胞发生特异反应。结论 成功表达了EEBV E蛋白并制备了特异性强、亲和力高的兔抗血清，为建立诊断EEBV感染的免疫学检测方法、有效防控流行性乙型脑炎奠定了基础。

• 单位
  新乡学院; 新乡医学院; 公共卫生学院