草酸青霉16β-葡萄糖苷酶的异源表达

作者：张念; 林颖颖; 祁可丹; 王国平; 欧阳蓓; 赵喜华^*

来源：江西师范大学学报(自然科学版), 2023, 47(03): 237-241.

DOI：10.16357/j.cnki.issn1000-5862.2023.03.03

• β-葡萄糖苷酶
• 异源表达
• 酶活

为探究真核菌株草酸青霉16的β-葡萄糖苷酶(16BGL)在不同宿主中的异源表达情况，该文通过基因克隆技术，将16BGL基因分别与pPIC9K、pET-28a、pGAPZαA载体进行连接，转化到毕氏酵母GS115或大肠杆菌Rosetta (DE3)上，筛选阳性克隆子，比较并分析其表达情况.结果表明：16BGL-9K未能成功电转到毕氏酵母GS115上；将16BGL-28a转化到大肠杆菌Rosetta上，使用最终物质的量浓度为50μmol·L-1的IPTG和质量分数为1.7%的乳糖在22℃下诱导可实现高水平表达，但极易形成包涵体且无活性.为了消除包涵体的影响，在相同条件下将16BGL的N端加入DsbA分泌信号肽，经SDS-PAGE检验，16BGL有高水平可溶性表达，但无活性；将16BGL-ZαA电转到GS115上，筛选阳性克隆子并接种到含YPG培养基的摇瓶中，结果表明：上清液蛋白质量浓度达到23.723 mg·mL-1,且有活性.真核来源的16BGL基因适合于真核宿主表达.

• 单位
  生命科学学院; 江西师范大学