铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-OprF的构建及其表达

作者：朱佑明; 罗永艾; 李文桂

来源：中国病原生物学杂志, 2011, (06): 420-423.

DOI：10.13350/j.cjpb.2011.06.014

• 铜绿假单胞菌
• OprF
• 大肠埃希菌
• 表达 Pseudomonas aeruginosa
• OprF
• Escherichia coli
• expression

目的构建并鉴定铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-OprF,研究该质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达。方法以铜绿假单胞菌PAOl标准株总RNA为模板,自行设计引物,采用RT-PCR方法扩增OprF抗原编码基因,经酶切、连接后定向克隆入大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-OprF,转化E.coliBL21(DE3)感受态细胞,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行分析和鉴定。结果 RT-PCR扩增出1 016 bp的OprF编码基因;重组质粒经双酶切和测序鉴定证实OprF基因成功插入pG...

• 单位
  重庆医科大学附属第一医院; 重庆市第一人民医院