单核细胞增生李斯特菌RsbS蛋白的抗应激机制作用研究

作者：夏叶; 李春华; 孙莹慧; 朱永军; 缪德年; 辛永萍

来源：中国预防兽医学报, 2021, 1-9.

• 单核细胞增生李斯特菌
• RsbS
• 抗应激
• 蛋白互作

为了研究单核细胞增生李斯特菌RsbS蛋白的抗应激机制，本研究设计针对rsbS基因完整ORF片段的引物，PCR扩增rsbS基因，构建重组表达质粒pET-30a-rsbS，转化表达菌株Rosetta（DE3），经IPTG诱导培养后SDS-PAGE检测，结果显示获得带His标签的RsbS重组蛋白，大小约18.8ku。利用His-Ni纯化柱纯化RsbS蛋白，得到浓度约1μg/mL的纯化蛋白。以纯化的RsbS蛋白免疫小鼠，制备多克隆抗体，经间接ELISA测定抗体效价为1:128000；经WesternBlot检测RsbS多抗具有良好反应原性。通过等温滴定量热试验检验RsbS的互作蛋白，结果显示RsbS与RsbR蛋白存在体外互作。将单增李斯特菌野生株10403S和缺失株△rsbR分别接种BHI液体培养基或含5% NaCl的BHI应激培养基培养后，对rsbS的转录和表达水平进行分析，结果显示经5% NaCl应激30 min后，野生株中rsbS的转录和表达水平增高，而缺失株中rsbS的转录和表达水平降低。综上表明本研究首次证实RsbS通过与RsbR蛋白互作参与单增李斯特菌的抗应激反应。本研究为进一步揭示RsbS蛋白的生物学功能及单增李斯特菌的抗应激机制研究奠定基础。

• 单位
  上海市农业科学院; 浙江大学医学院附属第二医院