SARS-CoV-2刺突蛋白受体结合域的可溶性表达及功能鉴定

作者：杨洵; 金佳佩; 马家秀; 卢卉双; 蔡雪飞^*

来源：中国生物制品学杂志, 2022, 35(08): 937-942.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003675

• 严重急性呼吸综合征冠状病毒2
• 刺突蛋白
• 受体结合域
• 血管紧张素转换酶2
• 原核表达

目的 可溶性表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARSCoV-2)刺突蛋白受体结合域（recepter binding domain,RBD），并对其进行功能鉴定。方法 利用生物信息软件对SARS-CoV-2刺突蛋白RBD区DNA序列中的稀有密码子进行替换优化。人工合成优化的RBD DNA全序列，插入p GEX 6P-1原核表达载体，构建重组表达质粒pGEX 6P-1/RBD，转化大肠埃希菌Rosetta感受态细胞，IPTG诱导表达重组RBD蛋白，并进行亲和层析纯化。采用SDS-PAGE、Western blot、Pull-down试验鉴定重组RBD蛋白，并应用其检测康复期患者的血清中和抗体。结果 优化后RBD基因序列在大肠埃希菌中的表达难易值（CAI）由0.215提高至1.0；重组表达质粒pGEX 6P-1/RBD经菌落PCR、双酶切及测序鉴定证明构建正确；获得的重组RBD蛋白为相对分子质量约60 000的可溶性蛋白，纯度约为82%，能与血管紧张素转换酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)发生特异性结合，并能测定康复期患者血清中的特异性抗体，且灵敏度较好。结论 成功获得了可溶性的重组RBD蛋白，该重组蛋白具备与人ACE2受体结合的功能，可用于中和抗体测定和疫苗接种后的效果评估。

• 单位
  重庆医科大学