传染性法氏囊病病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

作者：王晓丽; 钱晶; 马孙婷; 王晶宇; 夏兴霞; 诸玉梅; 郑素雅; 王永山^*; 欧阳伟^*

来源：中国兽医科学, 2020, 50(02): 159-167.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2020.0029

• 传染性法氏囊病病毒
• 抗体
• 间接ELISA

为了建立传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗体间接ELISA检测方法,本研究首先将VP2基因分3段(部分序列重叠),分别为VP2(1～600)、VP2(376～975)和VP2(751～1350),并根据大肠杆菌对密码子的偏爱性进行优化,将优化的3个VP2基因片段分别克隆于原核表达载体pET28a(+)中,转化E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后,进行SDS-PAGE和Western-blot,结果 3个重组VP2蛋白均获得了表达。用纯化的3个重组VP2蛋白rVP2(1～600)、rVP2(376～975)和rVP2(751～1350)分别作为包被抗原,建立了IBDV抗体间接ELISA(rVP2-ELISA)。用rVP2-ELISA、IDEXX-ELISA(IBDV)及中和试验对96份临床血清样本进行检测,结果显示,3个重组VP2蛋白建立的IBDV抗体间接ELISA检测方法、IDEXX-ELISA(IBDV)与中和试验比较,相对敏感性分别为97.1%、61.8%、58.8%和100%;相对特异性分别为85.5%、82.3%、83.9%和25.8%;符合率分别为89.6%、75.0%、75.0%和52.08%。本研究为研制IBDV抗体间接ELISA检测试剂盒(以重组VP2蛋白作为包被抗原)奠定了基础。

• 单位
  江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心; 食品与生物工程学院; 农业部; 江苏大学; 江苏省农业科学院