M-CSF核内稳定表达细胞系的构建和鉴定

作者：涂剑; 滕淑静; 张晓红; 赵雪琴; 唐圣松

来源：中国病理生理杂志, 2009, (03): 622-624.

• 巨噬细胞集落刺激因子
• pCMV/myc/nuc载体
• HeLa细胞

目的:构建真核细胞pCMV/nuc/M-CSF载体,建立M-CSF核内稳定表达细胞系,为进一步研究M-CSF的核内作用奠定基础。方法:采用PCR扩增人M-CSF活性片段,将M-CSF片段插入真核表达载体pCMV/myc/nuc,强制性把M-CSF引入细胞核内,通过PCR、测序鉴定筛选阳性重组体pCMV/M-CSF,脂质体介导转染HeLa细胞,经G418筛选后,用RT-PCR、间接免疫荧光鉴定其在HeLa细胞中的表达及定位分布。结果:琼脂糖电泳结果显示插入片段为1400bp左右,与预期M-CSF分子大小相当;DNA测序分析表明插入质粒的M-CSF无读码框移位,并与来源序列一致。RT-PCR和间接免疫荧光检测表明,转染pCMV/M-CSF的HeLa细胞能稳定表达M-CSFmRNA与M-CSF蛋白,且表达的M-CSF定位于HeLa细胞的细胞核。结论:成功构建了真核细胞pCMV/nuc/M-CSF载体,建立了M-CSF核内稳定表达细胞系。

• 单位
  岳阳职业技术学院; 南华大学