液相色谱法测定发酵液中阿魏酸酯酶的活力

作者：程娇梅; 齐祥明; 郭晓华^*

来源：粮食与饲料工业, 2022, (03): 54-58.

• 高效液相色谱法
• 阿魏酸酯酶
• 酶活
• 测定方法

基于高效液相色谱法测定产物阿魏酸含量的方法，建立了阿魏酸酯酶酶活力的测定方法。实验采用ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱(250 mm×4.6 mm, Agilent),以甲醇∶1%乙酸=70∶30作为流动相，等度洗脱(柱温35℃,流速1.0 ml/min,进样量10μl),在254 nm下测定阿魏酸含量。结果表明，该法测定酶反应产物阿魏酸含量的检测限为69.15μg/L,定量限为234.78μg/L,且在10～100 mg/L范围内呈良好的线性关系，R2=0.999 9,重复性RSD小于1%,加标收回率为99.25%。在此基础上进一步确定阿魏酸酯酶酶活力测定时的酶反应终止液为30%的乙酸溶液。当阿魏酸生成量在15～25 mg/L时，酶反应处于动力学上的线性区。试验待测酶样的最适温度为55℃,最适pH5.0。经检验，该酶活力检测方法的精密度RSD小于3.0%,达到酶活力检测要求。

• 单位
  中国海洋大学; 青岛蔚蓝生物股份有限公司