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摘要
目的 了解青海省格尔木市鼠疫耶尔森菌（Yersinia pestis）的生化特征，进行规律成簇的间隔短回文重复序列（CRISPR）基因分型和差异区段（DFR）研究，为青海省格尔木市鼠疫菌鉴定溯源、鼠疫科学防控提供理论依据。方法 选取1967年以来青海省格尔木市境内从人尸、宿主动物及媒介昆虫体内分离出28株鼠疫菌，通过糖醇酵解实验，研究其生化特征。采用十二烷基磺酸钠裂解和苯酚-氯仿法提取鼠疫菌DNA。分别对CRISPR的YPa、YPb和YPc3个位点进行PCR扩增并测序，然后将所测得CRISPR序列与文献最新报道的CRISPR Dictionary和NCBI数据库检索比对，以鉴定CRISPR spacer阵列。最后根据CRISPR spacer阵列的多态性对青海省格尔木市鼠疫菌进行基因分型。采用23对DFR(DFR01-DFR23)分型引物和质粒验证引物（PMT1）对试验菌株DNA进行分型验证。结果 鼠疫菌糖醇类酵解表型特征研究结果显示，28株鼠疫菌对甘油、阿胶糖、麦芽糖的酵解均为阳性，对鼠李糖、蜜二糖、脱氮的酵解均为阴性。CRISPR分型发现10种spacer，包括YPa 5种、YPb 4种、YPc 1种，a105和b51是新发现spacer。28株鼠疫菌归类为8个基因型，分为5个CRISPR类群：Cb4、Cb4’、Ca7、Ca7’和Ca35’。DFR分型可分为4个基因组型，分别为32型、5型、8型和49型。该地区主要基因组型为32型和5型。结论 青海省格尔木市鼠疫菌均为青藏高原型，当地鼠疫菌基因型较少，遗传较为稳定，具有明显的地区分布特征。同一地区不同菌株基因型有差异，存在鼠疫菌菌株微进化。
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