基于便携式和CFX96实时荧光PCR仪的冬虫夏草及其混伪品鉴定研究

作者：贠凯祎; 向丽; 王晓玥; 刘杨; 姚辉; 宋经元^*

来源：药学学报, 2019, 54(04): 746-752.

DOI：10.16438/j.0513-4870.2019-0078

• 冬虫夏草
• TaqMan探针
• 实时荧光PCR
• 分子鉴定

采用TaqMan探针实时荧光PCR方法对冬虫夏草及其混伪品进行分子鉴定研究。从100份冬虫夏草及其混伪品中提取总DNA,依据核糖体(rDNA)内部转录间隔区(internal transcribed spacer, ITS)序列,利用MEGA7.0软件进行比较分析,找出冬虫夏草及其混伪品的变异位点,通过Primer Premier 6.0软件设计一对特异性引物和TaqMan探针,分别在两种实时荧光PCR仪(Genesig q16和Bio-Rad CFX96)上进行灵敏度和特异性鉴定研究。灵敏度研究表明,在Bio-Rad CFX96系统中,该方法对冬虫夏草DNA模版的检测下限为0.016 ng·μL-1;在Genesig q16系统中,该方法对冬虫夏草DNA模版的检测下限为15.527 ng·μL-1。特异性鉴定研究表明,在Genesig q16和Bio-Rad CFX96系统上,该方法对冬虫夏草均具有良好的特异性,能与混伪品下垂虫草、古尼虫草、蛹虫草、蝉花、凉山虫草、新疆虫草明显区分。TaqMan探针实时荧光PCR方法可实现对冬虫夏草及其混伪品的准确鉴定,为药材市场的管理提供技术支撑,对名贵中药材的鉴别具有较好应用前景。

• 单位
  中国医学科学院药用植物研究所; 国家中医药管理局; 中国中医科学院中药研究所