柴胡皂苷D通过Akt/mTOR通路调控胰腺癌Panc-1细胞凋亡及自噬

作者：关月宏; 刘桂梅; 刘雨思; 兰琳博; 郑蕊; 刘晓斌^*

来源：中国中药杂志, 2023, 48(19): 5278-5284.

DOI：10.19540/j.cnki.cjcmm.20230713.401

• 柴胡皂苷D
• 胰腺癌
• 凋亡
• 自噬
• Akt/mTOR

该研究旨在探讨柴胡皂苷D(saikosaponin D)对胰腺癌Panc-1细胞增殖、凋亡和自噬的影响及其作用机制。采用细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(CCK-8)测定7、10、13、16、19、22、25、28μmol·L-1柴胡皂苷D对Panc-1细胞增殖活性的影响；分别设置对照组(0μmol·L-1)、柴胡皂苷D低浓度组(10μmol·L-1)和柴胡皂苷D高浓度组(16μmol·L-1),采用平板克隆形成实验检测柴胡皂苷D对Panc-1细胞克隆形成率的影响；采用苏木素-伊红(HE)染色观察柴胡皂苷D作用后细胞形态的变化；采用Hoechst 33258荧光染色检测柴胡皂苷D对细胞凋亡的影响；采用细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)检测柴胡皂苷D对细胞自噬的影响；采用蛋白免疫印迹(Western blot)法和免疫细胞化学法检测柴胡皂苷D对B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、剪切的caspase-3(cleaved caspase-3)、自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白轻链3(LC3)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)表达水平及分布的影响。结果显示，与对照组相比，柴胡皂苷D显著抑制Panc-1细胞增殖，且呈时间和浓度依赖性；柴胡皂苷D作用后细胞克隆形成率显著降低。与对照组相比，柴胡皂苷D处理组细胞萎缩变小，并伴有凋亡小体形成；细胞凋亡率显著升高，自噬小泡堆积显著增多；Bax、cleaved caspase-3、Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达显著升高，Bcl-2、caspase-3、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR的表达显著降低，均主要分布在细胞质中。因此，柴胡皂苷D可通过抑制Akt/mTOR通路抑制胰腺癌Panc-1细胞增殖并诱导其凋亡及自噬。

• 单位
  延安大学