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摘要
为了获得体外表达的高活性抗菌肽，通过分子克隆技术构建了抗菌肽Cathelicidin-1重组载体，在毕赤酵母(Pichia pastoris) GS115中表达，并鉴定包含该抗菌肽的发酵液的抑菌活性。通过DNA全合成技术合成编码抗菌肽Cathelicidin-1的全长基因，采用PCR技术扩增靶标基因并与真核表达载体pGAPZαA连接，获得重组质粒pGAPZαA-Cathelicidin-1；将重组质粒转化至大肠杆菌DH5α中扩增，提取质粒并经单酶切处理后转化毕赤酵母GS115；使用YPD培养基培养酵母，72 h后收集发酵液，通过Tricine-SDS-PAGE检测抗菌肽表达，并通过抑菌圈与抑菌曲线测定鉴定发酵液的抑菌活性。结果表明，抗菌肽Cathelicidin-1以分泌肽形式表达于发酵液中，并且该发酵液能够显著抑制大肠杆菌（Escherichia coli）的生长，而对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）则无明显抑菌效果。
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单位生命科学学院; 海南大学
