外泌体血小板反应蛋白2通过Wnt/β-catenin信号通路对宫颈癌SiHa细胞上皮-间质转化和生物学行为的影响

作者：黄艳丹; 卢艳^*; 韦敏; 李丹; 陈彬

来源：中华肿瘤防治杂志, 2022, 29(19): 1391-1400.

DOI：10.16073/j.cnki.cjcpt.2022.19.04

• 外泌体
• 血小板反应蛋白2
• 上皮-间质转化
• Wnt/β-catenin信号通路
• 宫颈癌

目的 探讨外泌体血小板反应蛋白2(THBS2)通过Wnt/β-catenin信号通路影响宫颈癌细胞上皮-间质转化(EMT)、增殖、侵袭和迁移能力。方法 采用THBS2过表达载体稳定转染至宫颈癌SiHa细胞中，获得THBS2-LV组和THBS2-NC组，分别提取外泌体。采用透射电子显微镜、纳米颗粒跟踪分析技术和蛋白质印迹法检测外泌体，定量聚合酶链式反应(qPCR)和蛋白质印迹法检测外泌体内THBS2表达情况，细胞计数盒8(CCK8)法检测外泌体对SiHa细胞增殖的影响。分别将exoTHBS2-LV和exoTHBS2-NC与宫颈癌SiHa细胞共培养72 h,蛋白质印迹法检测EMT相关蛋白和Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达水平。采用划痕实验及Transwell实验检测外泌体对SiHa细胞迁移及侵袭能力的影响。结果 电镜下，THBS2细胞的外泌体大部分呈椭圆形或圆形，直径50～200 nm。蛋白质印迹检测结果显示，2组的TSG101、HSP70和CD9表达均呈阳性。qPCR结果显示，外泌体THBS2-LV表达量为14.78±5.04,高于对照组(1.00±0.00),差异有统计学意义，t=4.737,P=0.009。蛋白质印迹法中exoTHBS2-LV表达量为1.09±0.11,高于对照组(0.41±0.16),t=5.811,P=0.004。CCK8实验结果显示，空白组(1.03±0.08)及exoTHBS2-NC组(0.97±0.11)细胞活力高于exoTHBS2-LV组(0.80±0.03),差异有统计学意义，F=6.552,P=0.031。蛋白质印迹法结果显示，与SiHa组和exoTHBS2-NC组相比，exoTHBS2-LV组中上皮标志E-cadherin蛋白增加(F=13.451,P=0.006),间质标志蛋白N-cadherin(F=9.680,P=0.013)、Vimentin(F=7.344,P=0.024)和Twist(F=7.302,P=0.025)的表达降低，通路关键蛋白β-catenin(F=17.568,P=0.003)及其下游靶基因Cyclin D1(F=21.862,P=0.002)和Survivin蛋白(F=16.218,P=0.004)表达降低。划痕实验结果显示，exoTHBS2-LV组、exoTHBS2-NC组和空白组迁移面积占比分别为(38.67±4.16)%、(61.30±2.08)%和(61.30±3.79)%,差异有统计学意义，F=42.815,P<0.001。Transwell检测结果显示，exoTHBS2-LV组迁移细胞数(124.47±17.58)低于SiHa组(238.50±33.40)和exoTHBS2-NC组(200.00±35.30),F=11.167,P=0.009;exoTHBS2-LV组侵袭细胞数(49.00±7.00)低于SiHa(111.47±6.46)和exoTHBS2-NC(99.47±4.98),F=85.559,P<0.001。结论 外泌体THBS2可通过Wnt/β-catenin信号通路影响宫颈癌SiHa细胞EMT及增殖、侵袭和迁移能力。

• 单位
  广西医科大学附属肿瘤医院