巨噬细胞RAW264.7通过TLR4-NF-κB信号通路调控流感病毒A/PR/8/34(H1N1)增殖的实验研究

作者：田晶; 隋海娟; 陈月^*

来源：中国免疫学杂志, 2022, 38(13): 1557-1563.

• RAW264.7
• 流感病毒
• 固有免疫
• TLR4
• NF-κB

目的：检测巨噬细胞RAW264.7对H1N1型流感病毒增殖的抑制作用，初步探讨固有免疫细胞抗病毒的作用机制。方法：采用10 TCID50、100 TCID50和1 000 TCID50低、中、高剂量流感病毒A/PR/8/34(PR8,H1N1)感染RAW264.7细胞，光学显微镜和Hoechst染色观察细胞形态变化，流式细胞术检测RAW264.7细胞凋亡率，q PCR和流式细胞术检测Influenza NP、TLR4和NF-κB p65水平，免疫荧光染色对细胞Influenza NP、TLR4和NF-κB p65表达进行定位，q PCR和ELISA检测IL-6、TNF-α和IFN-β水平。结果：与10 TCID50组比较，100 TCID50组和1 000 TCID50组细胞凋亡率显著提高(P<0.01);q PCR、流式细胞术和免疫荧光染色显示，与对照组比较，RAW264.7细胞感染PR8后Influenza NP、TLR4和NF-κB p65水平显著提高(P<0.01)，与10 TCID50组比较，100 TCID50组和1 000 TCID50组三者表达不同程度升高(P<0.05)，且1 000 TCID50组TLR4和NF-κB p65上调幅度大于100 TCID50组(P<0.05)；细胞感染PR8后IL-6、TNF-α和IFN-βm RNA水平和培养液各因子浓度较对照组显著升高(P<0.01)，与10 TCID50组比较，100 TCID50组和1 000 TCID50组各因子水平不同程度升高(P<0.05)，且1 000 TCID50组较100 TCID50组显著升高(P<0.01)。感染剂量与细胞凋亡率(FCM)和NP(FCM)、TLR4(FCM)、NF-κB p65(FCM)、IL-6、TNF-α和IFN-β(q PCR)水平呈正相关(r=0.634,P=0.002;r=0.747,P<0.001;r=0.812,P<0.001;r=0.790,P<0.001;r=0.805,P<0.001;r=0.874,P<0.001;r=0.863,P<0.001)。结论：巨噬细胞RAW264.7通过上调TLR4-NF-κB信号通路诱导下游炎症因子表达，发挥抗病毒增殖效应。

• 单位
  锦州医科大学