H9N2亚型禽流感病毒A/Chicken/Shandong/LY1/2017株反向遗传操作系统的建立

作者：李梦娇; 徐凯; 杨彬; 刘伟; 仇旭升; 孙英杰; 谭磊; 廖瑛; 宋翠萍; 刘炜玮; 张小荣; 丁铲; 孟春春^*; 吴艳涛^*

来源：中国动物传染病学报, 2020, 28(03): 49-54.

• 禽流感病毒
• H9N2亚型
• 反向遗传

为了构建H9N2亚型禽流感病毒A/Chicken/Shandong/LY1/2017的反向遗传操作平台,通过RT-PCR技术分别扩增该毒株的8个基因片段,并分别克隆至双向转录表达载体PHW2000中。8个质粒共转染293T/MDCK混合细胞,96 h后将细胞板反复冻融3次收获细胞悬液,将其接种10日龄SPF鸡胚,96 h后收集尿囊液并将拯救毒株命名为rH9N2,测定其HA效价为1∶256。rH9N2在HA、MDT、EID50、TCID50以及病毒生长曲线、空斑等方面保持了与亲本毒株一致的生物学特性。本研究成功构建了A/Chicken/Shandong/LY1/2017的感染性克隆,为今后通过基因替换、定点突变技术研究H9N2亚型禽流感病毒致病性的分子机制奠定了基础。

• 单位
  中国农业科学院上海兽医研究所; 扬州大学