外泌体中微小RNA-19a靶向第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因/蛋白激酶B/p53轴介导乳腺癌耐药性的机制

作者：樊艳; 洪文静; 吕娟; 郭宇飞

来源：中华实验外科杂志, 2017, 34(05): 770-773.

• 外泌体
• 微小RNA-19a
• 乳腺癌
• 耐药性
• 第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因/蛋白激酶B/p53轴

目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-19a通过乳腺癌阿霉素(ADM)耐药癌株MCF-7/A来源的外泌体在化疗药物耐药性传递中的作用及其潜在的分子机制。方法采用超速分级离心法从乳腺癌细胞培养上清中分离提取外泌体,投射电镜及Nanosight对外泌体进行观察鉴定。利用重组慢病毒载体构建稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的乳腺癌敏感细胞株GFP-MCF-7/S,通过细胞-细胞及细胞-外泌体共培养实验观察耐药性传递现象。实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)、Western blot及细胞转染技术检测miR-19a及第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因/蛋白激酶B/p53(PTEN/Akt/p53)轴在耐药性发生过程中的作用。结果与MCF-7/S比较,MCF-7/A细胞中miR-19a的表达(1.03±0.16比3.56±0.58,P=0.002)显著增加,miR-19a抑制剂处理后MCF-7/A细胞对化疗药物ADM的敏感性[(41.17±10.65)%比(23.45±8.89)%,P=0.011]显著增加。电镜下观察两种乳腺癌细胞分泌的外泌体均呈圆形或椭圆形,直径为40100 nm。荧光显微镜下对GFP的观察及细胞计数试剂盒(CCK-8)法对细胞增殖抑制率的检测结果显示ADM对MCF-7/S+MCF-7/A及MCF-7/S+MCF-7/Aexos组细胞的增殖抑制率显著低于MCF-7/S+MCF-7/S[(31.50±6.68)%比(51.20±12.44)%,P=0.006]及MCF-7/S+MCF-7/S exos[(27.67±6.02)%比(49.65±10.52)%,P=0.000]组细胞,且伴随着细胞miR-19a表达的增加(1.01±0.13比2.67±0.62,P=0.000)。Western blot检测结果显示外泌体中miR-19a能够通过显著抑制PTEN(1.15±0.18比0.67±0.13,P=0.000)及p53(0.99±0.18比0.49±0.11,P=0.005)蛋白的表达,增加Akt的磷酸化水平(1.15±0.18比0.67±0.13,P=0.000)促进受体细胞耐药的发生。结论miR-19a可通过外泌体包裹的形式传递乳腺癌细胞间的耐药性,进而通过对PTEN/Akt/p53轴的调控促进受体细胞耐药的发生。

• 单位
  河南中医药大学; 河南省中医院