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摘要
【背景】聚酮类化合物在医药领域有重要的应用，相关药物研发依赖聚酮合酶多变的结构认知，人体脂肪酸合酶的组成结构和催化机制与聚酮合酶相近，研究人体脂肪酸合酶结构可为聚酮合酶的研究奠定基础。【目的】在酿酒酵母中表达纯化人体脂肪酸合酶蛋白，确定合适的体外纯化条件。【方法】以酿酒酵母BJ5464为表达载体，构建带有His和Strep双亲和层析标签的重组质粒，诱导表达蛋白后用亲和层析方法获取目标蛋白，并结合凝胶电泳和FPLC技术，确定合适蛋白纯化条件。【结果】成功构建重组表达质粒pxw55-hfas-cSHII，并在体外纯化得到合适浓度和纯度的人体脂肪酸合酶蛋白，筛选不同缓冲液条件并结合电子显微镜观察结果反馈，确定合适的蛋白体外纯化体系。【结论】蛋白电镜结构分析需要有高纯度、合适浓度并且形成正确构象的蛋白样品，而人体脂肪酸合酶蛋白纯化体系的建立和纯化条件的确定为其电镜结构分析提供了良好的样品，为人体脂肪酸合酶的结构解析以及结构相似但更为复杂的聚酮合酶蛋白解析奠定了良好基础。
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单位微生物代谢国家重点实验室; 上海交通大学; 生命科学技术学院
