miRNA-4766-5p在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响

作者：巫梦雪; 王曼^*; 熊国平; 张刘莲

来源：肿瘤研究与临床, 2021, 33(12): 885-890.

• 卵巢肿瘤
• 微RNAs
• 细胞增殖
• 细胞侵袭
• miRNA-4766-5p

目的探讨卵巢癌组织中miRNA-4766-5p(miR-4766-5p)的表达及miR-4766-5p体外对卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响及其相关机制。方法选取2019年2月至2020年12月华中科技大学同济医学院附属武汉市中心医院行手术治疗的32例卵巢癌患者的癌组织及癌旁组织, 选择卵巢癌细胞株(A2780、OC3、SKOV-3、HO-8910、OVCAR-3)及正常卵巢上皮细胞株IOSE80用于后续实验。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-4766-5p在卵巢癌组织和各细胞株中的相对表达量。以miR-4766-5p相对表达量最低的细胞株为实验对象, 分别转染阴性对照质粒(对照组)和表达miR-4766-5p的质粒(miR-4766-5p组)。采用CCK-8法和Transwell实验分别检测过表达miR-4766-5p对所选细胞株细胞增殖和侵袭能力的影响。采用PITA和starBase V2.0软件预测miR-4766-5p的靶基因, 并通过双荧光素酶报告基因法进行验证。采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测过表达miR-4766-5p对所选细胞株靶基因表达的影响。结果卵巢癌组织和癌旁组织中miR-4766-5p相对表达量分别为1.06±0.17和5.25±0.70, 差异有统计学意义(t=5.86, P<0.01)。与IOSE80细胞比较, 各卵巢癌细胞株中miR-4766-5p相对表达量均降低(均P<0.01), 其中OC3细胞中miR-4766-5p相对表达量最低, 用于后续实验。CCK-8法检测显示, 培养2、3、4 d后miR-4766-5p组OC3细胞吸光度值均低于对照组(均P<0.05)。Transwell实验显示, miR-4766-5p组和对照组OC3细胞的穿胶细胞数分别为(25±6)个和(86±11)个, 差异有统计学意义(t=4.77, P<0.01)。采用PITA和starBase V2.0软件预测miR-4766-5p与微管去稳定蛋白1(STMN1)mRNA可能存在结合位点;双荧光素酶报告基因检测结果显示, miR-4766-5p的靶基因可能为STMN1。miR-4766-5p组和对照组OC3细胞中STMN1 mRNA相对表达量分别为0.28±0.05和1.00±0.05, 差异有统计学意义(t=10.47, P<0.01)。与对照组相比, miR-4766-5p组OC3细胞STMN1蛋白表达降低, 上皮细胞表型蛋白β-catenin表达升高, 间质细胞表型蛋白Snail表达降低, 细胞周期蛋白CDK2、cyclin E表达均降低。结论 miR-4766-5p在卵巢癌组织和卵巢癌细胞株中均低表达;miR-4766-5p可能通过下调其靶基因STMN1的表达, 抑制卵巢癌细胞的增殖和侵袭。

• 单位
  华中科技大学同济医学院; 武汉市中心医院