抗TNFα抗体Fab片段在大肠杆菌内表达的优化

作者：朱继莹; 李运程; 宋春雨; 邓学天; 张守涛^*

来源：生物技术, 2018, 28(05): 428-491.

DOI：10.16519/j.cnki.1004-311x.2018.05.0075

• Fab
• 信号肽
• 正交试验
• 原核表达

[目的]筛选在大肠杆菌内对抗TNFα抗体Fab片段转运效率最高的信号肽,并优化Fab片段表达的培养条件。[方法]通过对抗TNFα抗体Fab片段连接不同的信号肽序列获得了5种分泌载体并完成了重组蛋白的表达,通过Westen Blot检测蛋白表达情况并筛选出最适信号肽,通过正交试验优化了培养条件。[结果]对周质重组蛋白抗TNFα抗体Fab片段转运效率最高的信号肽为麦芽糖结合蛋白MalE,周质重组蛋白的最佳诱导条件为温度29℃、时间9 h、p H7. 5、IPTG浓度2. 0 mmol/L。[结论]通过信号肽筛选和培养条件优化,促进了菌体对周质重组蛋白抗TNFα抗体Fab片段的表达,其中最佳信号肽MalE对目的蛋白的相对表达量为1. 3。

• 单位
  郑州大学; 生命科学学院