基于脂多糖诱导人冠状动脉平滑肌细胞炎性活化的热毒生风型络风内动细胞模型构建

作者：李红梅; 王显

来源：中华中医药杂志, 2016, 31(08): 3057-3062.

• 热毒生风型络风内动
• 人冠状动脉平滑肌细胞
• 脂多糖
• 炎性反应通路
• 细胞模型

目的:利用脂多糖(LPS)诱导体外培养的人冠状动脉平滑肌细胞(HCASMC)TLR4-My D88炎性反应通路活化,建立热毒生风型络风内动细胞模型,为络风内动研究平台的科学化寻求新突破。方法:体外原代培养HCASMC,MTT法检测不同浓度(0、0.01、0.1、0.5、1、5、10、100μg/m L)LPS对HCASMC活力的影响,筛选出HCASMC活力在98%以上的LPS无毒性浓度范围。ELISA法检测无毒性浓度范围内LPS作用不同时间(6、24、48h)对细胞上清IL-6、TNF-α和IL-1β释放水平的影响,筛选出小范围LPS干预浓度和作用时间,RT-PCR法对IL-6、TNF-α、IL-1β、TLR4、My D88、NF-κB p65 mRNA进行半定量检测,Western Blotting法检测TLR4、My D88、NF-κB p65蛋白表达变化,确定最终造模条件。结果:LPS在5、10、100μg/m L浓度时细胞活力<98%,其余浓度均可促进HCASMC生长;0.5、1μg/m L LPS干预24、48h都可显著诱导产生炎性因子IL-6、IL-1β和TNF-α(P<0.05);1μg/m L LPS作用48h可最大程度激活TLR4-My D88炎性反应通路下游因子基因和蛋白表达(P<0.05)。结论:1μg/m L LPS干预HCASMC 48h可保证HCASMC处于持续的高炎性活化状态,可作为热毒生风型络风内动细胞模型的最佳造模条件。

• 单位
  北京中医药大学; 北京中医药大学东直门医院