肿瘤坏死因子-α通过激活Wnt/β-catenin通路增加肺微血管内皮屏障通透性

作者：吴彦立; 周文杰; 马希刚^*

来源：宁夏医科大学学报, 2022, 44(03): 239-245+266.

DOI：10.16050/j.cnki.issn1674-6309.2022.03.005

• Wnt/β-catenin通路
• 肿瘤坏死因子-α
• 肺微血管内皮屏障
• 闭合蛋白-5
• 闭锁小带蛋白1

目的 探讨炎症环境下Wnt/β-catenin通路对肺微血管内皮屏障通透性的影响。方法 分别用浓度为0、25、50、100、200 ng·mL~(-1)的肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)处理人肺微血管内皮细胞（human pulmonary microvascular endothelial cells,HPMVECs）24 h，采用CCK-8检测细胞存活率，实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测闭合蛋白-5(claudin-5)、闭锁小带蛋白1(zonula occludens 1,ZO-1)的表达，选取TNF-α最佳干预浓度。将细胞分为control组、TNF-α 100 ng·mL~(-1)组、Wnt通路抑制对照组（XAV-NC组）、Wnt通路抑制组（XAV组），应用Wnt/β-catenin通路抑制剂XAV-939(10μmol·L~(-1),24 h)后，采用CCK-8法检测细胞存活率，细胞划痕实验检测细胞迁移，FITC-葡聚糖检测微血管内皮屏障通透性，RT-qPCR和蛋白免疫印迹（Western blot）测定各实验组β-连环蛋白（β-catenin）、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、claudin-5、ZO-1的表达。结果 随TNF-α浓度增加，HPMVECs存活率逐渐降低，claudin-5、ZO-1 mRNA表达逐渐减少（P均<0.05），筛选出TNF-α作用的最适剂量为100 ng·mL~(-1)。应用XAV-939后，与control组相比，TNF-α 100 ng·mL~(-1)组细胞存活率及迁移率降低，Transwell小室通过FITC-葡聚糖增多，屏障相对通透性系数增大，β-catenin及Cyclin D1表达增加，claudin-5、ZO-1的表达减少（P均<0.05）；与XAV-NC组比，XAV组细胞存活率及迁移率增加，Transwell小室通过FITC-葡聚糖减少，屏障相对通透性系数减小，β-catenin及Cyclin D1表达减少，claudin-5、ZO-1的表达增加（P均<0.05）。结论 TNF-α可通过激活Wnt/β-catenin通路，使紧密连接蛋白claudin-5、ZO-1的表达减少，增加肺微血管内皮屏障通透性。

• 单位
  宁夏医科大学; 宁夏医科大学总医院