龙柴方含药血清联合恩替卡韦对HepG2.2.15肝癌细胞中P-糖蛋白和PI3K/AKT信号通路的影响

作者：郑雪; 严展鹏; 李堃; 徐婷婷; 王培; 林琳; 朱方石^*

来源：中医杂志, 2022, 63(23): 2272-2278.

DOI：10.13288/j.11-2166/r.2022.23.013

• 慢性乙型肝炎
• 乙型肝炎病毒
• 龙柴方
• 恩替卡韦
• P-糖蛋白
• PI3K/AKT信号通路

目的 观察龙柴方对恩替卡韦抗乙型肝炎病毒（HBV）效果的影响，并探讨可能作用机制。方法24只SD大鼠随机分为空白组和龙柴方低、中、高剂量组，每组6只。龙柴方低、中、高剂量组大鼠分别给予龙柴方药液9.84、19.68、39.36 g/（kg·d）灌胃，空白组给予和龙柴方中剂量组等量生理盐水灌胃，连续给药7天后制备含药血清。将HepG2.2. 15肝癌细胞分为空白对照组（等量培养基）、空白血清组（100%空白血清∶培养基=1∶9）、恩替卡韦组（15μmol/ml恩替卡韦∶培养基=1∶9）及恩替卡韦+龙柴方低、中、高剂量血清组（15μmol/ml恩替卡韦∶100%龙柴方低、中、高剂量含药血清∶培养基=1∶1∶8），培养24 h。MTT法检测各组细胞存活率，荧光定量PCR法测定HBV DNA表达量；ELISA法测定乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）表达量；Western blot法检测P-糖蛋白（P-gp）、蛋白激酶B(AKT)、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、同源性磷酸酶-张力蛋白（PTEN）蛋白表达。结果 各组HepG2.2. 15细胞存活率差异均无统计学意义（P>0.05）。与空白血清组比较，恩替卡韦+龙柴方中、低剂量血清组HBV DNA水平、HBeAg表达量明显降低（P<0.01）。与空白组对照比较，恩替卡韦+龙柴方中剂量血清组HBsAg表达量降低（P<0.05）。与空白血清组和恩替卡韦组比较，恩替卡韦+龙柴方低剂量血清组PI3K蛋白表达降低，恩替卡韦+龙柴方中剂量血清组PI3K、AKT、P-gp蛋白表达均降低，PTEN蛋白表达升高（P<0.05或P<0.01）。与恩替卡韦组+龙柴方高剂量血清组比较，恩替卡韦组+龙柴方中剂量血清组HBV DNA水平降低，PTEN蛋白表达升高（P<0.05或P<0.01）。结论 龙柴方对恩替卡韦抗HBV产生增效作用，其机制可能与上调PETN蛋白，抑制PI3K/AKT信号通路，从而下调P-gp表达有关，且以中剂量效果最佳。

• 单位
  南京中医药大学; 江苏省中医药研究院; 江苏省中西医结合医院