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摘要
目的 探究Sirt1在急性炎症状态下糖尿病小鼠肾损伤中的作用及分子机制。方法选择SPF级C57BL/6J雄性小鼠40只，8周龄，体重20～25 g。采用随机数字表法将小鼠分为五组：对照组(C组)、糖尿病组(D组)、脂多糖(LPS)+糖尿病组(L组)、LPS+糖尿病+Sirt1阻断剂EX527组(E组)和LPS+糖尿病+Sirt1激动剂银杏黄酮苷元组(G组),每组8只。糖尿病小鼠模型制备成功后，L组腹腔注射LPS 10 mg/kg; E组在糖尿病小鼠给予LPS处理前1 h腹腔注射EX527 5 mg/kg(溶于DMSO 0.2 ml);G组在糖尿病小鼠给予LPS处理前1 h腹腔注射银杏黄酮苷元200 mg/kg(溶于DMSO 0.2 ml);C组和D组在相同时点腹腔注射2%DMSO 0.15 ml。收集24 h尿液测定24h尿量和24 h尿蛋白浓度，眼球取血检测血清肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)浓度。取肾组织后采用ELISA法检测IL-1β、IL-18浓度，硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)含量，铁离子抗氧化能力法检测总抗氧能力(T-AOC),qPCR和Western blot法检测Sirt1、caspase-1、NLRP3、ASC mRNA表达量和蛋白含量，免疫共沉淀法检测乙酰化FoxO3a蛋白含量，二氢乙锭染色法计算活性氧(ROS)含量，免疫荧光双重染色法计算细胞焦亡率，并进行HE染色，光镜下观察病理。结果 与C组比较，D组、L组、E组和G组24 h尿量明显增多，尿蛋白浓度、血清Scr和BUN浓度、肾组织IL-1β、IL-18、NO含量、NLRP3、caspase-1、ASC mRNA表达量和蛋白含量、ROS含量和焦亡率均明显升高(P<0.05),T-AOC活力明显降低(P<0.05)。与D组比较，L组、E组和G组24 h尿量明显增多，尿蛋白浓度、血清Scr和BUN浓度、肾组织IL-1β、IL-18、NO含量、NLRP3、caspase-1、ASC mRNA表达量和蛋白含量、ROS含量和焦亡率均明显升高(P<0.05),T-AOC活力明显降低(P<0.05)。与L组比较，E组24 h尿量明显增多，尿蛋白浓度、血清Scr和BUN浓度、肾组织IL-1β、IL-18、NO含量、NLRP3、caspase-1、ASC mRNA表达量和蛋白含量、乙酰化FoxO3a蛋白含量、ROS含量和焦亡率均明显升高(P<0.05),T-AOC活力、Sirt1 mRNA和蛋白含量、FoxO3a mRNA表达量均明显降低(P<0.05);G组24 h尿量明显减少，尿蛋白浓度、血清Scr和BUN浓度、肾组织IL-1β、IL-18、NO含量、NLRP3、caspase-1、ASC mRNA表达量和蛋白含量、乙酰化FoxO3a蛋白含量、ROS含量和焦亡率均明显降低(P<0.05),T-AOC活力、Sirt1 mRNA表达量和蛋白含量均明显升高(P<0.05)。与E组比较，G组24 h尿量明显减少，尿蛋白浓度、血清Scr和BUN浓度、肾组织IL-1β、IL-18、NO浓度、NLRP3、caspase-1和ASC mRNA表达量和蛋白含量、乙酰化FoxO3a蛋白含量、ROS含量和细胞焦亡率均明显降低(P<0.05),T-AOC活力、Sirt1 mRNA表达量和蛋白含量均明显升高(P<0.05)。结论 在急性炎症状态下的糖尿病小鼠中，Sirt1升高可以降低乙酰化FoxO3a蛋白含量，减少小鼠尿量，降低尿蛋白、Scr、BUN含量、肾组织中炎性因子浓度和细胞焦亡水平，减轻氧化应激和炎症水平，从而减轻肾损伤。
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