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摘要
【目的】揭示水稻化感抗（耐）稗草的转录调控机制，为遗传修饰改良水稻化感性状做铺垫，也为杂草的防控提供新途径。【方法】利用SMART技术，通过同源重组方式，在Y2H菌株中构建水稻受稗草胁迫的酵母c DNA文库；利用限制性内切酶Bam HⅠ和NdeⅠ构建Os MYB57 C端缺失的p GBK-Os MYB57诱饵载体，按照Yeastmaker~(TM)Yeast Transformation System 2操作检测诱饵自激活活性；用酵母双杂交技术筛选Os MYB57互作蛋白，将所得互作蛋白的编码序列构建至p GAD载体，并与诱饵载体共转化Y2HGold菌株验证蛋白互作，再以Bi FC技术进一步验证蛋白间的互作。【结果】酵母c DNA文库库容量为1.36×10~7CFU/m L，插入片段在250～2000 bp，平均长度大于1000 bp，重组率为100%，库容量大且质量良好；筛选出4个有注释的互作蛋白，分别是16号RZFP34、50号4HTR、51号BM1PD和74号GTP1；回转验证及Bi FC结果显示RZFP34、4HTR、BMIPD、GTP1与Os MYB57在植物细胞中相互作用，其中RZFP34是一个E3亚型泛素连接酶，在植物中响应非生物逆境胁迫应答，且水稻Os RZFP34基因启动子区含有与水稻化感调控有关的水杨酸和茉莉酸等激素响应及MYB转录因子结合域相关元件。【结论】RZFP34通过与Os MYB57互作参与水稻化感转录调控而发挥作用。
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单位云南农业大学; 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
