白粉菌诱导簇毛麦叶片酵母双杂交文库构建及CMPG1-Ⅴ候选互作蛋白筛选

作者：张恒; 陈怡名; 张旭; 牛影; 赵佳; 吴承云; 郝永利; 孙丽; 王海燕; 肖进; 王秀娥^*

来源：南京农业大学学报, 2020, 43(04): 594-604.

• 小麦白粉病
• 簇毛麦
• 酵母双杂交
• CMPG1-Ⅴ基因
• 互作蛋白

[目的]本文旨在使用Mate&PlateTM技术构建簇毛麦受白粉菌诱导的酵母双杂交文库,鉴定正向调节小麦白粉病抗性的簇毛麦E3泛素连接酶蛋白CMPG1-Ⅴ的互作蛋白,为解析其抗病性机制奠定基础。[方法]提取白粉菌诱导前及诱导后1、2、4、6、12、24和48 h的簇毛麦叶片总RNA,利用SMART技术分离纯化mRNA,合成ds cDNA,将ds cDNA和pGADT7-Rec载体共同转入酵母菌株Y187,构建簇毛麦酵母双杂交文库,明确文库插入片段大小和滴度。以CMPG1-Ⅴ为诱饵筛选文库,并对部分互作蛋白进行了回补验证,利用BiFC方法验证CMPG1-Ⅴ与筛选到的1个互作蛋白CMIN6(MYB25-V)的体内互作。[结果]成功构建了受白粉菌诱导的簇毛麦叶片酵母双杂交文库,文库滴度为9.5×107 CFU·mL-1,插入片段长度为250～2 000 bp,重组率为100%。以CMPG1-Ⅴ为诱饵筛选文库,获得79个互作蛋白,挑选其中10个互作蛋白进行回补验证。通过BiFC试验验证了CMPG1-Ⅴ与MYB25-V的体内互作。MYB25-V及其在小麦中的同源基因TaMYB25受白粉菌诱导后均上调表达,推测MYB25-V可能参与调控小麦白粉病抗性。[结论]本研究成功构建了白粉菌诱导的簇毛麦酵母双杂交文库,为鉴定CMPG1-Ⅴ的互作蛋白并解析其抗病性机制奠定了基础。

• 单位
  南京农业大学; 作物遗传与种质创新国家重点实验室