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摘要
海洋中具有丰富的动植物及微生物资源，海洋真菌是其重要组成之一。我们前期的研究发现一株深海真菌白色侧齿霉Engyodontium album能产生具有抑菌活性的次级代谢产物engyodontiumin A，该化合物能抑制黑曲霉、金黄色葡萄球菌及创伤弧菌等病原菌的生长，是一种潜在的海洋源抗菌药物。目前，该菌遗传转化体系尚未建立，不利于开展次级代谢产物合成调控机制及其他功能基因研究。本研究成功制备了深海白色侧齿霉菌的原生质体，建立了借助聚乙二醇3350介导的原生质体转化体系，并将pCT74-sGFP载体成功导入白色侧齿霉的原生质体中，结果显示外源GFP能稳定表达。此外，为了明确白色侧齿霉菌是否能够开展基因敲除研究，通过氨基酸序列同源比对，我们选取酵母高渗甘油信号途径中的同源基因EaSHO1进行初步探究。利用同源重组的方法成功将目的基因EaSHO1的开放阅读框(ORF)替换成潮霉素磷酸转移酶基因(HPH)，由此获得EaSHO1基因敲除突变体，并对突变体进行Southern杂交验证及初步的表型分析。结果表明，EaSHO1缺失不影响白色侧齿霉菌的营养生长及对高盐胁迫的响应，亚细胞定位结果显示EaSho1-GFP主要定位于菌丝隔膜。综上所述，本研究成功构建了一株深海白色侧齿霉菌的遗传转化体系，并借此对其基因EaSHO1进行了初步生物学功能分析。
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单位福建农林大学; 闽江学院; 生命科学学院
