马铃薯StERF5转录因子酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定

作者：徐萍萍; 房宸曦; 梁丽娜; 王亚鹏; 张宁^*; 司怀军

来源：分子植物育种, 2018, 16(19): 6308-6313.

DOI：10.13271/j.mpb.016.006308

• 马铃薯
• ERF5基因
• 诱饵载体
• 酵母双杂交

为了筛选与马铃薯StERF5转录因子相互作用的宿主蛋白,构建其诱饵载体,本研究利用PCR方法扩增得到马铃薯StERF5基因的编码序列,克隆至载体p MD18-T,验证正确后插入到酵母双杂交系统诱饵表达载体pGBKT7,经双酶切、PCR反应及测序验证其正确后,利用PEG/LiAc法将构建好的重组诱饵载体pGBKT7-StERF5及空载体pGBKT7分别转化到酵母Y2HGlod感受态细胞中,检测其对酵母菌株是否有毒性作用和自激活活性。结果表明:扩增得到StERF5基因,成功构建了诱饵表达载体pGBKT7-StERF5,此诱饵载体对酵母宿主细胞无毒性且不具自主激活报告基因的功能。研究结果可为进一步利用酵母双杂交技术筛选与ERF5基因互作的宿主蛋白及功能研究提供科学依据。

• 单位
  甘肃农业大学; 生命科学技术学院