重组质粒pGMLV-SC1 RNAi的构建及其对猪卵巢颗粒细胞c-Fos的影响

作者：叶丹凤; 郑艳华; 丁涛; 薛士鹏; 马红霞

来源：广东医学, 2014, (03): 336-339.

DOI：10.13820/j.cnki.gdyx.2014.03.003

• c-Fos
• RNA干扰
• 慢病毒
• 猪卵巢颗粒细胞

目的构建慢病毒载体及观察其介导的RNA干扰猪卵巢颗粒细胞c-Fos基因表达情况。方法通过在线软件设计猪c-Fos基因shRNA序列,合成、退火形成双寡链核酸后克隆到PGMLV-SC1载体,测序。用构建的慢病毒表达载体和包装质粒共转染293T细胞,包装成4组病毒（shRNA c-Fos1、shRNA c-Fos2、shRNA c-Fos3、shRNA c-Fos4）,并测定滴度。感染猪卵巢颗粒细胞,采用PCR和Western blot检测各组细胞c-Fos mRNA和蛋白表达。结果重组克隆中插入片段序列与设计的Oligo序列完全一致。滴度为1×108TU/mL,感染复数30时,阴性对照组、实验shRNA c-Fos4、shRNA c-Fos3、shRNA c-Fos2、shRNA c-Fos1组c-Fos mRNA的表达分别为对照组的0.842 7±0.065 6、0.797 6±0.073 8、0.694 1±0.048 9、0.653 7±0.047 0、0.312 3±0.010 6倍（P<0.05）,c-Fos蛋白的表达下降。结论实验shRNA c-Fos1组c-Fos基因下调最明显,成功构建猪卵巢颗粒细胞c-Fos基因慢病毒RNAi表达载体并筛选出最佳siRNA序列。为c-Fos基因的功能研究提供了研究基础。