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摘要
【目的】通过对生防菌淡紫灰链霉菌X33(Streptomyces lavendulae X33)建立稳定高效的遗传转化体系、评估启动子permE与内源性启动子启动活性，为菌株X33活性产物的生物合成机制研究、构建高产基因工程菌奠定基础。【方法】以携带整合型质粒pIB139的大肠杆菌(Escherichia coli)ET12567(pUZ8002)为供体菌、菌株X33为受体菌进行接合转移；对影响接合转移效率的关键因素(接合转移培养基、热激温度、预萌发时间、供受体比例及抗生素覆盖时间等)进行优化；以质粒pIB139为骨架、β-葡萄糖苷酶(GUS)为报告基因构建启动子活性检测载体，分析4个内源性启动子及permE的启动活性。【结果】通过接合转移方法成功建立了菌株X33的遗传转化体系，其最佳接合转移条件为：孢子于55℃热激10 min，预萌发1 h，供、受体比例为10∶1，以高氏一号为接合转移培养基，混合培养12 h后覆盖抗生素，接合转移效率可达5.8×10-5；启动子活性分析表明：链霉菌常用启动子permE的启动活性远高于4个内源性启动子P116、P4565、P5092、P5500。【结论】建立及优化了菌株X33的遗传转化体系，确定了启动子permE在菌株X33中的启动活性。
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单位江西省果蔬采后处理关键技术及质量安全协同创新中心; 江西农业大学; 江西省农业微生物资源开发与利用工程实验室
