微小RNA-330-3p对小鼠肝脏缺血再灌注损伤影响的研究

作者：李世朋; 朱志军^*; 孙丽莹; 张海明; 周光鹏; 孙杰; 崔滨

来源：中华肝胆外科杂志, 2021, 27(05): 371-376.

• 微RNAs
• 再灌注损伤
• 磷酸甘油酸变位酶5
• 肝脏

目的探讨微小RNA(miR)-330-3p对小鼠肝脏缺血再灌注损伤(IRI)的影响,并分析可能的机制。方法雄性C57BL/6小鼠80只,鼠龄7～8周,体重23～25 g,无特殊病原体,采用随机数字表法分为8组,再灌注2 h组、6 h组、12 h组、24 h组以及假手术组,miR-330-3p agomir组(术前注射miR-330-3p激动剂)、miR-330-3p antagomir组(术前注射miR-330-3p抑制剂)和阴性对照组(术前注射miRNA阴性对照),每组10只。除假手术组外均制备肝脏IRI模型,聚合酶链反应、Western印迹、免疫组化检测miR-330-3p、磷酸甘油酸变位酶5(PGAM5)、活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(cleave caspase-1)及gasdermin D(GSDMD)等的表达。双荧光素酶报告验证miR-330-3p的靶基因。采用miR-330-3p模拟物或抑制序列、miRNA阴性对照、PGAM5干扰RNA(siRNA)和干扰序列的阴性对照转染AML12细胞,然后检测PGAM5、Nod样受体家族含pyrin结构域蛋白3(NLRP3)、cleave caspase-1、GSDMD的表达。结果小鼠肝脏缺血再灌注过程中,miR-330-3p相对表达量降低,而PGAM5相对表达量增高。miR-330-3p agomir组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)均低于阴性对照组,而miR-330-3p antagomir组ALT、AST高于阴性对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与阴性对照组比较,miR-330-3p agomir组小鼠肝组织中cleave caspase-1表达降低,而miR-330-3p antagomir组表达增加。双荧光素酶报告证实PGAM5是miR-330-3p靶基因。AML12细胞转染PGAM5 siRNA后PGAM5、NLRP3、cleave caspase-1、GSDMD蛋白相对表达为(0.24±0.09)、(0.12±0.07)、(0.15±0.07)、(1.08±0.08),均低于干扰序列阴性对照组(1.17±0.14)、(0.36±0.09)、(0.68±0.09)、(1.36±0.08),差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 miR-330-3p可减轻小鼠肝脏IRI,其机制可能与miR-330-3p靶向抑制PGAM5介导的细胞焦亡有关。

• 单位
  首都医科大学附属北京友谊医院; 首都医科大学