体外转录小鼠MAGE-A3 mRNA在NIH/3T3细胞中的表达

作者：陈鹤丹; 林煊; 谢颖; 陈尧; 杨君仪; 王赟; 张世超; 胡祖权; 曾柱^*; 刘丽娜^*

来源：安徽医科大学学报, 2020, 55(08): 1157-1160.

DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2020.08.002

• MAGE-A3
• 体外转录mRNA
• 蛋白表达

目的构建编码MAGE-A3的真核表达载体,体外转录获得MAGE-A3 mRNA,在哺乳动物细胞NIH/3T3中表达MAGE-A3蛋白。方法通过逆转录PCR从三阴型乳腺癌细胞系4T1中扩增得到MAGE-A3编码基因,插入到载体pcDNA3.1(+)中,成功构建重组表达载体pcDNA3.1-MAGE作为体外转录RNA的模板。利用T7体外转录试剂盒获得MAGE-A3 RNA,添加poly(A)尾后进行mRNA纯化。将纯化后的MAGE-A 3 mRNA转染到NIH/3T3细胞中,Western blot实验检测MAGE-A3蛋白的表达。结果 pcDNA3.1-MAGE-A3正确表达和构建。体外转录MAGE-A3 mRNAA260/A280为1.92,浓度是872.3 ng/μl,长度约为500 bp。转染MAGE-A3 mRNA后,NIH/3T3能表达大小约35 ku的MAGE-A3蛋白。结论成功构建编码MAGE-A3的真核表达载体,体外转录获得纯度较高的MAGE-A3 mRNA,该mRNA能在NIH/3T3细胞中表达MAGE-A3蛋白。

• 单位
  基础医学院; 贵州医科大学