ManLAM调节ERK1/2和p38诱导结核性关节炎FLS细胞中IL-37的表达

作者：黄震^*; 武红梅; 谢振东; 方宏才

来源：九江学院学报(自然科学版), 2019, 34(02): 99-103.

DOI：10.19717/j.cnki.jjun.2019.02.026

• 成纤维样滑膜细胞
• 甘露糖修饰的脂阿拉伯甘露聚糖
• 白细胞介素-37
• 磷酸化

目的使用人成纤维样滑膜细胞(FLS细胞)系探究甘露糖修饰的脂阿拉伯甘露聚糖(ManLAM)对人结核性关节炎中IL-37产生的作用及相关分子机制。方法通过从H37Rv结核杆菌中提取并纯化ManLAM,使用TRIzol法提取人FLS细胞中的总RNA。用逆转录试剂盒将总RNA反转录为cDNA。使用单克隆抗体和辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠二抗(Santa Cruz Biotechnology)对FLS细胞中表达出来的IL-37进行检测。使用MAPK抗体试剂盒(Cell Signaling Technology),通过蛋白质免疫印迹法(Western Blot)对磷酸化的、总的p38和ERK1/2 MAPKs进行检测。针对TLR2或TLR4的siRNA或者抑制性siRNA,每5×105个FLS细胞转染60pmol siRNA;ELISA法和流式细胞术检测FLS细胞中表达出来的IL-37水平,用以评估ManLAM诱导FLS细胞中IL-37表达的能力以及观察p38和ERK1/2等抑制剂对ManLAM诱导产生的IL-37表达的影响。结果由于ManLAM是水相的主要成分,我们发现ManLAM诱导IL-37 mRNA及蛋白表达具有时间和剂量依赖性,然而这种活性几乎可以全部被ERK1/2 (U0126)和p38 (SB203580)抑制剂所消除。在FLS细胞中,ManLAM刺激主要是诱导ERK1/2和p38磷酸化,以及细胞表面TLR2的表达。TLR2表达受到干扰后,ERK1/2和p38磷酸化水平也显著下降,同时IL-37的产物也大大减少。虽然ManLAM也能促进FLS细胞中TLR4的表达,但是干扰TLR4对ManLAM诱导IL-37的表达没有影响。结论 ManLAM通过上调TLR2/p38或ERK1/2信号通路来诱导人FLS细胞中IL-37的产生,而且,这为解释ManLAM促进结核杆菌持久性的病理学作用提供了一个重要的依据。

• 单位
  深圳市龙岗中心医院; 九江学院附属医院; 深圳市龙岗区第三人民医院