宫颈癌大鼠模型癌组织中DAPK基因启动子甲基化与宫颈癌发展和转移的关联

作者：孙晓东; 任娟娟^*; 康婷; ***

来源：临床和实验医学杂志, 2021, 20(20): 2140-2144.

• 宫颈癌
• DAPK
• 甲基化
• 异种移植
• 肿瘤生长

目的探讨宫颈癌大鼠模型癌组织中DAPK基因启动子甲基化与宫颈癌发展和转移的关联。方法选择45只成年雌性Sprague-Dawley大鼠为研究对象,通过皮下注射宫颈癌Si Ha细胞建立异种移植瘤动物模型。选取其中35只大鼠进行甲基化实验分组:对照组(正常大鼠,腹腔注射DMSO,n=10),宫颈癌组(宫颈癌大鼠模型,n=25)和宫颈癌邻近组(与宫颈癌组为相同大鼠,获取癌旁组织样本,n=25),通过甲基化特异性聚合酶链式反应分析各组大鼠组织的DAPK甲基化状态;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)分析大鼠组织中DAPK mRNA的表达。同时将剩余10只宫颈癌大鼠根据实验目的分为宫颈癌组(宫颈癌大鼠模型,给予DMSO腹腔注射,n=5)和甲基化抑制组(在宫颈癌大鼠的模型中注射1 mg/g 5-Aza-CdR,n=5),每周1次,注射至第40天,游标卡尺测量并计算异种移植大鼠肿瘤体积生长,并对肿瘤组织进行称重分析; RT-PCR分析大鼠组织中DAPK mRNA的表达。结果对照组大鼠未出现甲基化,宫颈癌组有19只大鼠肿瘤出现了DAPK甲基化,甲基化率为76.00%,宫颈癌邻近组4只出现DAPK甲基化,甲基化率为16.00%,宫颈癌组较对照组和宫颈癌邻近组的DAPK甲基化率升高,宫颈癌邻近组较对照组DAPK甲基化率升高,差异有统计学意义(P <0.05)。在任何具有启动子甲基化的肿瘤组织或邻近组织中均未检测到DAPK mRNA的表达,在所有启动子未甲基化的肿瘤组织、肿瘤邻近组织和正常组织中均检测到DAPK mRNA的表达,甲基化组织DAPK mRNA的表达显著低于未甲基化组织,差异有统计学意义(P <0.05)。注射后第10天肿瘤体积、重量比较差异无统计学意义(P> 0.05),注射后第20、30、40天甲基化抑制组较宫颈癌组大鼠肿瘤体积和重量减小,差异有统计学意义(P <0.05)。仅用PBS处理的大鼠的肿瘤组织中都没有发现DAPK mRNA表达,而在来自用5-Aza-CdR处理的大鼠的所有肿瘤中检测到DAPK mRNA的重新表达,两组比较差异有统计学意义(P <0.05)。结论 DAPK表达的丧失可能与宫颈癌中异常的启动子区域甲基化有关,DAPK甲基化抑制可减缓体内Si Ha细胞的生长,证实了DAPK基因启动子高甲基化与宫颈癌癌变的发展转移有紧密联系。

• 单位
  延安大学附属医院; 榆林市第二医院