奶牛乳房炎源肺炎克雷伯菌PCR和LAMP检测方法的建立

作者：罗阳; 田唯嘉; 何芳; 浣成; ***; 张佰忠; 宋武; 杨青^*; 易康乐^*

来源：河南农业科学, 2023, 52(02): 145-150.

DOI：10.15933/j.cnki.1004-3268.2023.02.016

• 奶牛乳房炎
• 肺炎克雷伯菌
• UreD基因
• PCR
• LAMP

为快速鉴定因肺炎克雷伯菌侵染引起的奶牛乳房炎，进一步为该疾病提供更合理的治疗方案，分别以肺炎克雷伯菌16S-23S rDNA内部转录间隔层序列(Internal transcribed spacer,ITS)和脲酶UreD基因为靶点，利用PCR技术和环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)构建奶牛乳房炎源肺炎克雷伯菌快速鉴定方法。结果表明，利用PCR技术扩增ITS序列能准确鉴定出肺炎克雷伯菌，在核酸质量浓度为5×10-2ng/μL的环境中依然能实现稳定扩增；利用LAMP技术扩增UreD基因的最佳反应温度为62℃，其最低检测核酸质量浓度为5×10-7ng/μL，检测灵敏度是PCR方法的105倍。综上，建立了PCR技术和LAMP技术快速鉴定奶牛乳房炎型肺炎克雷伯菌的方法，特异性强且灵敏度高。

• 单位
  湖南省畜牧兽医研究所; 湖南农业大学