CT26细胞分泌的BMPs对小鼠树突状细胞和巨噬细胞表面PD-L1表达的影响

作者：赵茂媛; 王喻义; 杜驰; 罗锋

来源：四川大学学报（医学版）, 2017, 48(01): 33-40.

DOI：10.13464/j.scuxbyxb.2017.01.008

• 树突状细胞
• 巨噬细胞
• PD-L1
• BMPs

目的观察小鼠结肠癌CT26细胞培养上清中骨形成蛋白(BMPs)对树突状细胞(DCs)和巨噬细胞表面程序性死亡分子配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)表达的影响,探讨其对免疫的调控。方法体内实验:将皮下接种和腹腔接种CT26肠癌细胞的BALB/c荷瘤小鼠随机分为对照组、BMPs抑制剂LDN193189组和LDN193189联合紫杉醇组,肿瘤接种第8天,分组给药18d。测量肿瘤体积和腹围,流式细胞术分别检测其瘤体或腹水中DCs和巨噬细胞百分比及其表面PD-L1阳性表达率。体外实验:对正常BalB/c小鼠骨髓分离培养的树突状细胞(BMDCs)和巨噬细胞(BMMs)分别做以下处理:1不作处理(对照组);2加入CT26上清;3与CT26不接触共培养;4加入CT26上清联合LDN193189;5与CT26不接触共培养,加入LDN193189;6加入CT26上清联合LDN193189和紫杉醇;7与CT26不接触共培养,加入LDN193189和紫杉醇。ELISA检测CT26培养上清中是否有BMPs的表达,流式细胞术检测不同处理下BMDCs和BMMs表面的PD-L1表达阳性率,RT-PCR和Western blot检测干扰素调节因子1(IRF-1)mRNA和蛋白的表达。结果体内实验中,LDN193189组肿瘤体积或腹围最大,DCs和巨噬细胞百分比及其表面PD-L1阳性表达率最低;体外实验中,ELISA检测结果显示,BMPs在CT26上清中有表达,其质量浓度为(0.59±0.09)ng/mL。加入CT26上清联合LDN193189和与CT26不接触共培养并且加入LDN193189组BMDCs和BMMs表面的PD-L1表达阳性率较低,接近对照组水平。RT-PCR和Western blot检测结果显示,对照组BMDCs、BMMs中IRF-1mRNA和蛋白表达低于与CT26不接触共培养或加入CT26上清组;LDN193189加入到加有CT26上清或与CT26共培养的BMDCs和BMMs中,IRF-1mRNA和蛋白表达下降;而两个LDN193189联合紫杉醇组,IRF-1mRNA和蛋白表达均增加。结论 CT26分泌的BMPs增强树突状细胞和巨噬细胞表面PD-L1的表达。

• 单位
  四川大学华西医院; 生物治疗国家重点实验室