组蛋白三甲基化转移酶SETD2对肺腺癌上皮—间充质转化的影响

作者：陈睿; 杨欣; 赵伟庆; 方成; 季枚^*

来源：中国肿瘤, 2020, 29(02): 140-147.

DOI：10.11735/j.issn.1004-0242.2020.02.A010

• 组蛋白三甲基化转移酶SETD2
• 肺腺癌
• 增殖
• 迁移
• 侵袭
• 上皮—间充质转化

[目的]研究组蛋白三甲基化转移酶SETD2与肺腺癌的临床相关性及其在肺腺癌组织中的表达,探讨SETD2对肺腺癌细胞株A549和H1975增殖、迁移、侵袭能力及上皮—间充质转化(EMT)过程的影响。[方法]结合癌症基因组图谱数据库(TCGA),分析SETD2的表达水平与肺腺癌患者总生存期(OS)的相关性。分别应用Real-time PCR和Western blot方法检测SETD2mRNA和蛋白在人肺腺癌组织芯片(包含12对肺腺癌组织标本)中的表达情况。构建慢病毒载体过表达Lv-SETD2-A549、Lv-SETD2-H1975稳转细胞株,沉默Si-SETD2-A549、Si-SETD2-H1975稳转细胞株及阴性对照组LvNC、Si-NC稳转细胞株。通过细胞计数试剂盒(CCK-8)法、细胞划痕和Transwell小室实验,分别检测过表达和沉默SETD2对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。采用Western blot方法比较4组细胞株中EMT相关蛋白上皮型钙黏附蛋白(E-cadherin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及正常对照组(GADPH)的表达水平差异;应用免疫荧光法检测4组间E-cadherin、Vimentin的表达水平。[结果] (1)SETD2表达与肺腺癌患者OS成正相关(P=0.014)。(2)SETD2mRNA和蛋白在肺腺癌组织中表达明显下降,且与临床分期明显相关(P=0.001)。(3)与Lv-NC组相比,A549和H1975在SETD2过表达组中SETD2mRNA和蛋白显著升高,细胞相对增殖活性(A549-0h:0.18±0.02,A549-24h:0.22±0.04,A549-48h:0.35±0.06,A549-72h:0.55±0.05;H1975-0h:0.21±0.02,H1975-24h:0.31±0.04,H1975-48h:0.43±0.03,H1975-72h:0.71±0.09),细胞穿膜数(A549:54.00±11.23;H1975:57.13±10.28)均显著下降,迁移间距(A549:0.65±0.09;H1975:0.51±0.10)降低;这些指标,在SETD2沉默组中恰恰相反。(4)与阴性对照组相比,过表达SETD2可上调A549、H1975细胞株中E-cadherin的蛋白表达水平,而下调N-cadherin、Vimentin的蛋白表达水平;这些指标在SETD2沉默组中则相反;免疫荧光实验结果显示过表达SETD2的A549和H1975组E-cadherin的红色荧光强度较Lv-NC组增强,而Vimentin的绿色荧光较Lv-NC组明显减弱。[结论] SETD2在肺腺癌组织中表达下降,SETD2低表达组患者OS较高表达明显下降。上调SETD2表达水平能够有效抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,且逆转其发生EMT,抑制SETD2的表达则可诱导上述过程;SETD2可能发挥抑癌作用。

• 单位
  常州市第一人民医院; 苏州大学附属第三医院