摘要
目的探讨成纤维细胞缺氧后葡萄糖转运蛋白1(glucose transporter 1,GLUT-1)表达特点与规律。方法分离培养大鼠肺成纤维细胞,将细胞分成4组(n=3):常氧组[普通培养箱(5%CO2,21%O2,37℃)]及缺氧12、24、48 h组[置缺氧培养箱(1%O2,5%CO2,94%N2,37℃)中培养12、24、48 h]。取各组细胞进行免疫荧光和免疫印迹分析蛋白水平的表达变化,RT-PCR分析细胞GLUT-1mRNA水平的变化,GOD-PAP测定培养上清葡萄糖含量。结果免疫印迹检测结果显示,缺氧12、24、48 h组GLUT-1的蛋白表达均显著高于常氧组(P<0.05),缺氧48 h组GLUT-1表达显著高于缺氧12、24 h组(P<0.05),缺氧24 h组与缺氧12 h组差异无统计学意义(P>0.05);免疫组化结果与免疫印迹结果相一致,缺氧12、24、48 h组GLUT-1蛋白表达水平均高于常氧组;RT-PCR及琼脂糖凝胶电泳结果显示,GLUT-1 mRNA表达水平随缺氧时间逐渐升高,缺氧12 h组与常氧组相比差异无统计学意义(P>0.05),缺氧24、48 h组均显著高于常氧组(P<0.05),缺氧48 h组显著高于缺氧24 h组(P<0.05);缺氧12、24、48 h组上清中葡萄糖含量均较常氧组显著降低(P<0.05)。结论缺氧上调大鼠肺成纤维细胞GLUT-1的表达,有利于细胞在缺氧状态下对葡萄糖的摄取。
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单位第三军医大学