同源比较法克隆单抗CAb-1重链可变区基因

作者：杨向民; 姚西英; 邢金良; 张思河; 冯媛; 陈志南

来源：中国生物制品学杂志, 2005, (05): 30-33.

DOI：10.3969/j.issn.1004-5503.2005.05.008

• 重链可变区
• 兼并引物
• FR1区
• 同源序列

目的获得抗人大肠癌单抗CAb-1重链可变区VH的准确基因。方法结合生物信息学同源比较分析,利用高兼并的FR15′端处引物扩增的单抗CAb-1的VH基因,并与数据库中序列比对,在同源性最高的抗体序列的信号肽处二次设计引物,用RT-PCR法获得抗体基因VH的准确序列。结果选定了与已知抗体VH高度同源的序列进行引物设计。凝胶电泳可见预期大小DNA条带。经测序表明,配对于信号肽处的扩增产物不仅与配对于抗体可变区FR1的结果一致,而且也纠正了配对于CAb-1的VH的FR1的兼并引物所引入的氨基酸突变。结论所优化设计的引物能够扩增完整的抗人大肠癌单抗CAb-1重链可变区基因,为小分子工程抗体改造奠定了基础。

• 单位
  第四军医大学