hsa-miR-381过表达慢病毒载体的构建、转染和表达

作者：周苏娜; 叶文广; 崔耀友; 梁军; 张明鑫

来源：山西医科大学学报, 2017, 48(03): 241-245.

DOI：10.13753/j.issn.1007-6611.2017.03.009

• miR-381
• 慢病毒载体
• 食管鳞癌
• 基因转染

目的构建hsa-miR-381过表达慢病毒载体病毒载体,并对其在食管鳞癌TE10细胞中miR-381表达调节效果进行鉴定。方法利用PCR法扩增miR-381基因序列,将目的基因miR-381克隆到携带Green&Puro的慢病毒载体LV3中,经双酶切及测序鉴定后大量抽提;利用脂质体将含目的基因的重组质粒和包装质粒p Gag/Pol、pRev、p VSV-G共转染293T细胞;用得到的慢病毒转染TE10细胞,通过荧光显微镜观察转染状况,实时荧光定量PCR分析转染前后miR-381的表达。结果酶切与测序结果证明成功构建重组质粒,并成功包装成慢病毒,实验组病毒滴度为2×108TU/ml,空白阴性对照组病毒滴度为2×108TU/ml。TE10细胞转染过表达慢病毒后miR-381的表达升高,TE10-381组has-miR-381的表达丰度是TE10组的456.05倍。结论 LV3-hsa-miR-381慢病毒载体构建成功,并能明显增加TE10细胞中miR-381的表达量。

• 单位
  第四军医大学; 唐都医院