干扰卷曲蛋白1基因表达抑制胶质瘤细胞增殖、迁移及上皮-间充质转化

作者：宋振宇; 刘献志^*; 刘增进; 吴力新

来源：中华实验外科杂志, 2022, 39(07): 1306-1309.

• 胶质瘤
• 卷曲蛋白1
• 增殖
• 迁移
• 上皮-间充质转化

目的观察卷曲蛋白1(FZD1)对神经胶质瘤细胞增殖、迁移和上皮-间充质转化的作用。方法将U118细胞分为低氧0、24、48 h组, 利用实时定量聚合酶链反应(PCR)法和蛋白质印迹法(Western blot)法检测FZD1 mRNA和蛋白的表达。U118细胞分为对照Ⅰ组、对照短发卡RNA(shRNA) Ⅰ组、sh-缺氧诱导因子(HIF)-1α组、对照Ⅱ组、对照shRNA Ⅱ组、sh-FZD1组。利用脂质体法将对照短发卡RNA(Control shRNA)、HIF-1α shRNA、FZD1 shRNA转染胶质瘤细胞, 噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力, 平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力, 小室迁移(Transwell)试验检测细胞迁移, Western blot检测HIF-1α、波形蛋白、N-钙黏蛋白、E-钙黏蛋白的表达。采用SPSS 19.0统计软件分析, 多组间比较采用双因素方差分析或克鲁斯卡尔-沃利斯(Kruskal-Wallis)秩和检验。结果低氧24 h和48 h组细胞FZD1 mRNA和蛋白表达水平高于低氧0 h组(mRNA水平:2.46±0.39, 3.54±0.44比1.00±0.04, F=83.537, P<0.01;蛋白水平:1.41±0.06, 1.85±0.09比1.06±0.06, χ2=7.200, P<0.01)。sh-HIF-1α组HIF-1α和FZD1蛋白表达水平低于对照Ⅰ组和对照shRNA Ⅰ组(HIF-1α:0.50±0.06比1.03±0.03、0.97±0.03, χ2=7.200, P<0.01;FZD1:0.60±0.06比1.03±0.04、0.96±0.04, χ2=7.200, P<0.01)。培养24、48、72、96 h后, sh-FZD1组细胞活性低于对照Ⅱ组和对照shRNA Ⅱ组(24 h:0.159±0.006比0.204±0.008、0.216±0.008;48 h:0.218±0.009比0.329±0.009、0.331±0.009;72 h:0.296±0.007比0.447±0.011、0.472±0.013;96 h:0.361±0.008比0.563±0.013、0.582±0.015, F=32.790, P<0.01)。sh-FZD1组细胞克隆形成数量低于对照Ⅱ组和对照shRNA Ⅱ组(238.00±21.28比343.00±17.35、371.69±21.28, χ2=7.200, P<0.01)。sh-FZD1组细胞迁移数目低于对照Ⅱ组和对照shRNA Ⅱ组(18.33±2.52比31.33±3.51、36.67±2.08, χ2=6.880, P<0.01)。sh-FZD1组FZD1、波形蛋白、N-钙黏蛋白表达水平低于对照Ⅱ组和对照shRNA Ⅱ组, 而E-钙黏蛋白表达高于对照Ⅱ组和对照shRNA Ⅱ组(FZD1:0.33±0.06比1.05±0.05、0.97±0.03, χ2=7.200, P<0.01;波形蛋白:0.65±0.06比1.00±0.02、0.96±0.03, χ2=6.880, P<0.01;N-钙黏蛋白:0.37±0.04比1.02±0.03、0.89±0.02, χ2=7.200, P<0.01;E-钙黏蛋白:2.07±0.09比0.96±0.04、1.02±0.05, χ2=6.489, P<0.05)。结论 FZD1参与调控胶质瘤细胞增殖、迁移和上皮-间充质转化过程。

• 单位
  第一附属医院神经外科; 郑州大学